想知道親和層析空柱該如何進(jìn)行上樣那就不要錯過本篇

　　親和層析空柱是專為抗體、重組蛋白和其他生物大分子純化、脫鹽、濃縮而設(shè)計的。公司提供1ml和5ml兩種規(guī)格的中壓層析空柱，客戶可根據(jù)樣本特性，靈活地選用合適的柱管及其相關(guān)填料介質(zhì)(包括離子交換、免疫親和、分子篩和反相等類型)。
 

　　親和層析純化生物大分子通常采用柱層析的方法。親和層析空柱上樣時應(yīng)注意選擇適當(dāng)?shù)臈l件，包括上樣流速、緩沖液種類、pH、離子強(qiáng)度、溫度等，以使待分離的物質(zhì)能夠充分結(jié)合在親和吸附劑上。

 

　　一般生物大分子和配體之間達(dá)到平衡的速度很慢，所以樣品液的濃度不易過高，上樣時流速應(yīng)比較慢，以保證樣品和親和吸附劑有充分的接觸時間進(jìn)行吸附。
 

　　特別是當(dāng)配體和待分離的生物大分子的親和力比較小或樣品濃度較高、雜質(zhì)較多時，可以在上樣后停止流動，讓樣品在層析柱中反應(yīng)一段時間，或者將上樣后流出液進(jìn)行二次上樣，以增加吸附量。樣品緩沖液的選擇也是要使待分離的生物大分子與配體有較強(qiáng)的親和力。另外樣品緩沖液中一般有一定的的離子強(qiáng)度，以減小基質(zhì)、配體與樣品其它組分之間的非特異性吸附。
 

　　生物分子間的親和力是受溫度影響的，通常親和力隨溫度的升高而下降。所以在上樣時可以選擇適當(dāng)較低的溫度，使待分離的物質(zhì)與配體有較大的親和力，能夠充分的結(jié)合;而在后面的洗脫過程可以選擇適當(dāng)較高的溫度，使待分離的物質(zhì)與配體的親和力下降，以便于將待分離的物質(zhì)從配體上洗脫下來。
 

　　上樣后用平衡洗脫液洗去未吸附在親和吸附劑上的雜質(zhì)。平衡緩沖液的流速可以快一些，但如果待分離物質(zhì)與配體結(jié)合較弱，平衡緩沖液的流速還是較慢為宜。
 

　　如果存在較強(qiáng)的非特異性吸附，可以用適當(dāng)較高離子強(qiáng)度的平衡緩沖液進(jìn)行洗滌，但應(yīng)注意平衡緩沖液不應(yīng)對待分離物質(zhì)與配體的結(jié)合有明顯影響，以免將待分離物質(zhì)同時洗下。
 

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