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分析一下蛋白層析柱的兩種安裝方法

更新時間:2018-10-10      點擊次數:5148
   分析一下蛋白層析柱的兩種安裝方法

  裝柱子(添硅膠)時,有兩種方法:即濕法裝柱和干法裝柱,二者各有優劣。不論干法還是濕法,硅膠(固定相)的上表面一定要平整,并且硅膠(固定相)的高度一般為15cm左右,太短了可能分離效果不好,太長了也會由于擴散或拖尾導致分離效果不好。

  濕法裝柱是先把硅膠用適當的溶劑拌勻后,再填入柱子中,然后再加壓用淋洗劑 “走柱子”,本法大的優點是一般柱子裝的比較結實,沒有氣泡。

  干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠,然后再輕輕敲打柱子兩側,至硅膠界面不再下降為止,然后再填入硅膠至合適高度,后再用油泵直接抽,這樣就會使得柱子裝的很結實。接著是用淋洗劑“走柱子”,一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓,下面再用油泵抽,這樣可以加快速度。

  干法裝柱較方便,但大的缺陷在于“走柱子”時,由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱(可以用手摸柱子明顯感覺到),容易產生氣泡,這一點在使用低沸點的淋洗劑時如乙,二氯甲烷更為明顯。

  雖然產生的氣泡在加壓的情況下不易察覺,但是,一旦撤去壓力,如在上樣、加溶劑等操作的時候,氣泡就會釋放出來,嚴重時,整個柱子變花,樣品不可能平整地通過,當然也就談不上分離了。

  解決的辦法是:

  、硅膠一定要填結實;

  第二、一定要用較多的溶劑“走柱子”,一定要到柱子的下端不再發燙,恢復到室溫后再撤去壓力。

  也有介紹在硅膠的上層填上一小層石英砂,防止添加溶劑的時候,使得樣品層不再整齊。但是如果小心上樣,添加溶劑,則沒有這個必要。

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