層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米，但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外， 直徑加大，洗脫液體體積增大，樣品稀釋度大。常見的有玻璃層析柱和加壓層析柱。

　　玻璃層析柱，開口大，加料快，不需要其他儀器的配合，上方可以做成標準口與其他的標口玻璃儀器相接，但有不容易測量，篩網下方容易殘留很多液體，層析速度較慢，不準確的特點，一般用于對精度要求沒有那么高的實驗，

　　加壓層析柱，兩端一般使用4F材料，耐腐蝕，酸堿性的耐度也可以，中段有玻璃材料的，也有有機玻璃材料的，需要與蠕動泵相結合，加快層析速度，用泵將料打進，如果沒有泵則使用比較麻煩。

　　結構

　　層析柱通常由以下幾個部分組成：

　　●柱體：一般為玻璃或塑料材質，具有一定的長度和直徑，用于容納固定相和樣品溶液。

　　●固定相：填充在柱體中的物質，可以是吸附劑(如硅膠、氧化鋁等)、離子交換樹脂、凝膠等。不同的固定相對不同的物質具有不同的吸附或分離能力。

　　●活塞或閥門：用于控制樣品溶液和洗脫液的流速。

　　●柱頭和柱尾：分別位于柱體的兩端，用于連接進樣管和收集管。

　　工作原理

　　層析柱的分離原理基于不同物質在固定相和流動相之間的分配系數差異。當樣品溶液通過層析柱時，其中的各成分會與固定相發生相互作用，并以不同的速度在柱中移動。具體過程如下：

　　●進樣：將待分離的樣品溶液通過進樣管加入層析柱中。

　　●吸附與分離：樣品中的各成分在固定相上發生吸附、分配、離子交換等作用，根據其與固定相的親和力不同而逐漸分離。

　　●洗脫：使用適當的洗脫液(如溶劑、緩沖液等)通過層析柱，將吸附在固定相上的成分逐步洗脫下來。洗脫液的選擇應根據待分離物質的性質和分離目的來確定。

　　●收集：在柱尾處收集流出的洗脫液，根據不同的流出時間或體積，可以得到不同的分離組分。

　　分類

　　1.按固定相類型分類：

　　吸附層析柱：以吸附劑為固定相，如硅膠層析柱、氧化鋁層析柱等。適用于分離具有不同極性的化合物。

　　離子交換層析柱：固定相為離子交換樹脂，根據物質的離子電荷性質進行分離。

　　凝膠層析柱：使用凝膠作為固定相，如葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等。主要根據分子大小進行分離。

　　2.按操作方式分類：

　　柱層析：傳統的層析方式，通常在實驗室中進行。需要手動操作，包括進樣、洗脫和收集等步驟。

　　高效液相色譜柱(HPLC 柱)：在高壓下進行分離，具有更高的分離效率和速度。通常與自動化的儀器設備配合使用。

　　應用

　　1.化學分析：用于分離和純化化學物質，如有機化合物、無機離子等。可以對混合物進行定性和定量分析。

　　2.生物化學研究：分離蛋白質、核酸、多糖等生物大分子。在蛋白質純化、酶分離、核酸提取等方面有廣泛應用。

　　3.制藥工業：用于藥物的分離、純化和質量控制。例如，從天然產物中提取有效成分，純化生物制品等。

　　4.環境監測：分離和檢測環境中的污染物，如農藥殘留、重金屬離子等。

　　使用注意事項

　　1.選擇合適的固定相和洗脫液：根據待分離物質的性質和分離目的，選擇具有適當吸附能力和選擇性的固定相，并確定合適的洗脫液。

　　2.控制流速：流速過快可能導致分離效果不佳，流速過慢則會延長實驗時間。應根據具體情況調整流速，以獲得最佳的分離效果。

　　3.避免氣泡：在裝填層析柱和進行實驗過程中，應盡量避免產生氣泡。氣泡會影響分離效果，甚至導致實驗失敗。

　　4.保持柱體清潔：實驗前后應清洗層析柱，去除殘留的樣品和雜質，以保證下次實驗的準確性。

　　5.注意安全：在使用有機溶劑等危險化學品時，應遵守實驗室安全規定，采取必要的防護措施。

　　層析柱和色譜柱沒有區別，有顏色的譜帶叫作色譜，確切的應叫層析柱，因為現在色帶是沒有顏色的，但都習慣叫色譜柱。

　　層析柱和色譜柱真真要說區別那還是有一點區別，那就是色譜柱只是用在色譜儀中，層析柱不一定是用在色譜儀中，比如：用溶劑洗脫的柱層析所用的層析柱就不叫色譜柱。

　　層析柱與液相柱的區別：

　　1、壓力

　　液相色譜柱(尤其是分析性液相色譜)：壓力較高，一般為10-20Mpa

　　層析柱：一般為常壓，或使用真空泵(0.1Mpa左右)

　　2、填料

　　液相色譜柱：粒徑較小(常規5-20um)

　　層析柱：粒徑較大

　　3、分離度

　　由第二項決定，粒徑越小，單位長度下理論塔板數越高

　　液相色譜柱：分離度比層析柱好

　　4、效率

　　液相色譜柱：分離速度快，一般在一小時內

　　層析柱：分離時間長，一小時以上